概述

藥品的穩(wěn)定性特指其保持理化性質(zhì)和生物學(xué)特性不變的能力。若藥品的穩(wěn)定性差,發(fā)生分降解而引起質(zhì)量變化,則不僅有可能使藥效降低,而且生成的雜質(zhì)還有可能具有明顯的毒副作用,而影響藥品使用的安全性和有效性。

所以,藥品穩(wěn)定性試驗的目的是考察藥物在溫度、濕度、光線等因素的影響下隨時間變化的規(guī)律,為藥品的生產(chǎn)、包裝、貯存、運輸條件提供科學(xué)依據(jù),同時通過試驗建立藥品的有效期,以保障用藥的安全有效。 

穩(wěn)定性試驗研究是藥品質(zhì)量控制研究的基本內(nèi)容,與藥品標(biāo)準(zhǔn)的建立緊密相關(guān)。穩(wěn)定性試驗研究具有階段性特點,貫穿藥品研究與開發(fā)的全過程。

穩(wěn)定性試驗分為:影響因素試驗、加速試驗與長期試驗。

要求 1: 影響因素試驗用 1 批供試品進行(原料藥或制劑)。 加速試驗與長期試驗要求用3批供試品進行。

要求2:原料藥供試品應(yīng)是達(dá)到一定規(guī)模生產(chǎn)的產(chǎn)品。供試品量相當(dāng)于制劑穩(wěn)定性試驗所要求的批量;原料藥合成工藝路線、方法、步驟應(yīng)與大生產(chǎn)一致。

要求3:藥物制劑供試品應(yīng)是放大試驗的產(chǎn)品,其處方和工藝與大生產(chǎn)一致。藥物制劑,如片劑或膠囊劑,每批放大試驗的規(guī)模,至少應(yīng)為10000片或粒。大體積包裝的制劑,如靜脈注射液等,每批放大規(guī)模的數(shù)量至少應(yīng)為各項試驗所需總量的10倍。特殊品種、特殊劑型所需數(shù)量,根據(jù)具體情況另定。

要求4:供試品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與臨床前研究及臨床試驗和規(guī)模生產(chǎn)所使用的供試品質(zhì)童標(biāo)準(zhǔn)一致。

要求5:加速試驗與長期試驗所用供試品的包裝應(yīng)與上市產(chǎn)品一致。原料藥所用包裝應(yīng)采用模擬小桶,但所用材料與封裝條件應(yīng)與大桶一致。 實驗室規(guī)模的產(chǎn)品僅可用作輔助性穩(wěn)定性預(yù)試驗。

要求6:研究藥物穩(wěn)定性,要采用專屬性強、準(zhǔn)確、精密、靈敏的藥物分析方法與有關(guān)物質(zhì)(含降解產(chǎn)物及其他變化所生成的產(chǎn)物)的檢查方法,并對方法進行驗證,以保證藥物穩(wěn)定性結(jié)果的可靠性。 在穩(wěn)定性試驗中,應(yīng)重視有關(guān)物質(zhì),特別是降解產(chǎn)物的檢查和鑒定。

要求7:由于放大試驗比規(guī)模生產(chǎn)的數(shù)量要小,故藥品注冊申請人應(yīng)在獲得批準(zhǔn)后,從放大試驗轉(zhuǎn)人規(guī)模生產(chǎn)時,對初通過生產(chǎn)驗證的3批規(guī)模生產(chǎn)的產(chǎn)品仍需進行加速與長期穩(wěn)定性試驗。

穩(wěn)定性試驗的內(nèi)容

原料藥與制劑穩(wěn)定性試驗的內(nèi)容和側(cè)重點略有不同。 原料藥及主要劑型的穩(wěn)定性重點考察項目見下表。

1、穩(wěn)定性試驗結(jié)果的界定 藥品穩(wěn)定性試驗過程中,質(zhì)量的變化主要按照具約品標(biāo)準(zhǔn),并結(jié)合穩(wěn)定性重點考察項目的要求進行檢測和評價。

穩(wěn)定性試驗考察中，原料藥的“顯著變化”"是指其質(zhì)量檢驗的結(jié)果已經(jīng)不能滿足其藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限度的要求。 

制劑的“顯著變化"定義為:

① 含量較它的初始值變化超過5%,或用生物或免投學(xué)方法檢測效價時不符合標(biāo)準(zhǔn)限度。

② 任何降解產(chǎn)物超過了它的標(biāo)淮限度。

③ 外觀、物理特性和功能性檢查(如顏色,相分離,重新混懸能力、結(jié)塊,硬度,每次給藥劑量)不符合相應(yīng)藥品標(biāo)準(zhǔn)的限度規(guī)定;但是,加速條件下有此物理特性的改變可以除外(如栓劑的軟化,乳劑的熔化)。

④ pH不符合標(biāo)準(zhǔn)限度。

⑤ 12個劑量單位的溶出度不符合標(biāo)準(zhǔn)限度。

2、原料藥物穩(wěn)定性試驗的內(nèi)容 

(1)影響因素試驗:影響因素試驗是將藥品置于比加速試驗更為劇烈的條件下進行的穩(wěn)定性考察。其目的是探討藥物的固有穩(wěn)定性,了解影響其穩(wěn)定性的因素及可能的降解途徑與降解產(chǎn)物,為制劑生產(chǎn)工藝、包裝,、貯存條件和建立降解產(chǎn)物分析方法提供科學(xué)依據(jù)。

供試品可以用1批原料藥物進行,將供試品置適宜的開口容器中(如稱量瓶或培養(yǎng)皿),攤成≤5mm厚的薄層，疏松原料藥攤成≤10mm厚的薄層,進行以下試驗。 當(dāng)試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)降解產(chǎn)物有明顯的變化,應(yīng)考慮其潛在的危害性,必要時應(yīng)對降解產(chǎn)物進行定性或定量分析。

① 高溫試驗:供試品開口置適宜的潔凈容器中,60℃溫度下放置10天,于第5天和第10天取樣,按穩(wěn)定性重點考察項目進行檢測。若供試品有明顯變化(如含量低于規(guī)定限度)則在40℃條件下同法進行試驗。若60℃無明顯變化,不再進行40℃試驗。

② 高濕度試驗:供試品開口置恒濕密閉容器中,在25℃分別于相對濕度90%士5%條件下放置10天,于第5天和第10天取樣,按穩(wěn)定性重點考察項目要求檢測,同時準(zhǔn)確稱量試驗前后供試品的重量,以考察供試品的吸濕潮解性能。

若吸濕增重5%以上,則在相對濕度75%土5%條件下,同法進行試驗;若吸濕增重5%以下,其他考察項目符合要求,則不再進行此項試驗。 恒濕條件可在密閉容器如干燥器下部放置飽和鹽溶液,根據(jù)不同相對濕度的要求,可以選擇NaCl飽和溶液(相對濕度75%土1%,15.5~60℃),KNO3飽和溶液(相對濕度92.5%,25℃)。

③ 強光照射試驗:供試品開口放在裝有日光燈的光照箱或其他適宜的光照裝置內(nèi),于照度為4500lx士500lx的條件下放置10天,于第5天和第10天取樣,按穩(wěn)定性重點考察項目進行檢測,特別要注意供試品的外觀變化。

光照裝置,建議采用定型設(shè)備“可調(diào)光照箱”,也可用光櫥,在箱中安裝日光燈數(shù)支使達(dá)到規(guī)定照度。 箱中供試品臺高度可以調(diào)節(jié),箱上方安裝抽風(fēng)機以排出可能產(chǎn)生的熱量,箱上配有照度計,可隨時監(jiān)測箱內(nèi)照度,光照箱應(yīng)不受自然光的干擾,并保持照度恒定,同時防止塵埃進人光照箱內(nèi)。

④ 破壞試驗:根據(jù)藥物的性質(zhì)必要時可設(shè)計破壞試驗條件,探討pH與氧及其他必要的條件對藥物穩(wěn)定性的影響,并研究分降解產(chǎn)物的分析方法。并對分降解產(chǎn)物的性質(zhì)進行必要的分析。

(2)加速試驗:加速試驗是將藥物置于模擬氣候條件下進行的穩(wěn)定性考察。其目的是通過加速藥物的化學(xué)或物理變化,探討藥物的穩(wěn)定性,為制劑設(shè)計、包裝、運輸、貯存提供必要的依據(jù)。

供試品要求3批,按市售包裝,在溫度40℃士2℃,相對濕度75%+5%的條件下放置6個月。所用加速試驗設(shè)備應(yīng)能控制溫度士2℃,相對濕度士5%,設(shè)備內(nèi)各部分溫濕度應(yīng)該均勻,適合長期使用,并能對真實溫度與濕度進行監(jiān)測.試驗期間,于第1個月,2個月、3個月,6個月末分別取樣一次,按穩(wěn)定性重點考察項目檢測。

在上述條件下,如6個月內(nèi)供試品經(jīng)檢測不符合制訂的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度要求,則應(yīng)在中間余件下,即在溫度30℃+2℃,相對濕度65%士5%的情況下(可用Na,CrO.飽和溶液,30℃,相對濕度64.8%)進行加速試驗,時間仍為6個月。

對溫度特別敏感的藥物,預(yù)計只能在冰箱中(4~8℃)保存,此種藥物的加速試驗,可在溫度25土2℃、相對濕度60%士10%的條件下進行,時間為6個月。

(3) 長期試驗:長期試驗是將藥物置于接近實際貯存的條件下進行的穩(wěn)定性考察。其目的為制訂藥物的有效期提供依據(jù)。實際貯存條件參考下圖。

我國總體來說屬亞熱帶(部分地區(qū)屬于濕熱帶),故長期試驗條件與協(xié)調(diào)委員會(ICH)采用的條件基本一致。 供試品3批,市售包裝,在溫度25℃士2℃、相對濕度60%土10%的條件下放置12個月?？紤]到我國南北方的氣候差異,也可選擇在溫度30℃土2℃,相對濕度65%土5%的條件下放置12個月。

每3個月取樣一次,分別于0個月、3個月,6個月,9個月,12個月取樣按穩(wěn)定性重點考察項目進行檢測。12個月以后,仍需繼續(xù)考察,分別于18個月、24個月、36個月取樣進行檢測。將結(jié)果與0個月比較,以確定藥物的有效期。

由于實驗數(shù)據(jù)的分散性,一般應(yīng)按95%可信限進行統(tǒng)計分析,得出合理的有效期。如3批統(tǒng)計分析結(jié)果差 別較小, 則取其平均值為有效期;若差 別較大則取其短的為有效期。 如果數(shù)據(jù)表明,測定結(jié)果變化很小,說明藥物是很穩(wěn)定的,則不作統(tǒng)計分析。

對溫度特別敏感的藥物,長期試驗可在溫度6℃+2℃的條件下放置12個月,按上述時間要求進行檢測,12個月以后,仍需按規(guī)定繼續(xù)考察,制訂在低溫貯存條件下的有效期。

3、藥物制劑穩(wěn)定性試驗的內(nèi)容 藥物制劑穩(wěn)定性試驗研究,應(yīng)以原料藥的性質(zhì)和穩(wěn)定性試驗的結(jié)果為基礎(chǔ), 如溫度、濕度、光線對原料藥穩(wěn)定性的影 響;并在處方篩選(原輔料相容性)工藝設(shè)計、包裝選擇的過程中,根據(jù)主藥與輔料的性質(zhì),參考原料藥物的試驗方法,進行影響因素試驗、加速試驗和長期試驗。

(1)影響因素試驗:藥物制劑進行影響因素試驗的目 的是考察制劑處方、生產(chǎn)工藝和包裝條件的合理性。

用1批供試品進行試驗。將供試品,如片劑、膠囊劑、注射劑(注射用無菌粉末如為西林瓶裝,不能打開瓶蓋,以保持嚴(yán)封的完整性),除去外包裝,置適宜的開口容器中,進行高溫試驗、高濕度試驗與強光照射試驗。 試驗條件、方法和取樣時間均與原料藥物的影響因素試驗相同。

對于一些特殊制劑還需要進行低溫/凍融穩(wěn)定性試驗研究考察。 包括,難溶性藥物的注射劑,考察冰凍后重新置于常溫下的再溶解性能；凝膠等外用制劑,考察冰凍后復(fù)熔時凝膠體流變學(xué)性質(zhì)的保持能力；以及脂質(zhì)體、納米粒等新劑型,冰凍后產(chǎn)生的冰晶可能會刺破微球體脂質(zhì)膜,破壞劑型結(jié)構(gòu),導(dǎo)致包封家下隆,進而引發(fā)體內(nèi)藥動/藥效行為等的不可預(yù)知的變化。

(2)加速試驗:藥物制劑加速穩(wěn)定性試驗的目的是通過加速藥物制劑的化學(xué)蚊例理變化,松討藥物制劑的穩(wěn)定性,為處方設(shè)計.工藝改進.質(zhì)量研究、包裝改進、運輸,貯存提俠必要的依據(jù).試驗設(shè)備與原料藥穩(wěn)定性試驗的要求相同。

供試品要求3批,按市售包裝,在溫度40 ℃土2℃,相對濕度75%士5%的余件下放置6個月。在試驗期間,于第1個月,2個月、3個月,6個月末分別取樣一次,按穩(wěn)定性重點考察項目檢測。

在上述條件下,如6個月內(nèi)供試品經(jīng)檢測不符合制訂的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度要求,則應(yīng)在中間條件下,即在溫度30℃土2℃,相對濕度65%土5%的情況下進行加速試驗,時間仍為6個月。溶液劑、混懸劑、乳劑、注射液等含有水性介質(zhì)的制劑可不要求相對濕度。

對溫度特別敏感的藥物制劑,預(yù)計只能在冰箱(4~8℃)內(nèi)保存使用,此類藥物制劑的加速過驗,可在溫度25℃士2℃、相對濕度60%土10%的條件下進行,時間為6個月。

乳劑、混懸劑、軟膏劑、乳膏劑,糊劑,凝膠劑、,眼膏劑、栓劑、氣霧劑、泡騰片及泡騰顆粒宜直接采用溫度30℃土2℃、相對濕度65%土5%的條件進行試驗,其他要求與上述相同.

對于包裝在半透性容器中的藥物制劑,例如低密度聚乙烯制備的輸液袋、塑料安瓶、眼用制劑容器等,則應(yīng)在溫度40℃士2℃、相對濕度25%土5%的條件(可用CH3COOK·1.5H20飽和溶液)進行試驗。

(3)長期試驗:供試品3批,市售包裝,進行長期穩(wěn)定性試驗,照穩(wěn)定性重點考察項目進行檢測。試驗條件、取樣間隔、數(shù)據(jù)分析、有效期的建立等,均與原料藥物的長期試驗相同。

對于包裝在半透性容器中的藥物制劑,則應(yīng)在溫度25℃土2℃、相對濕度40%士5%,或溫度30℃士2℃相對濕度35%土5%的條件進行試驗。

(4)配伍穩(wěn)定性試驗:對于臨床使用時,需要臨時配制成溶液再使用的藥物制劑,還應(yīng)考察配伍和使用過程中的穩(wěn)定性,以防發(fā)生沉淀、分解變質(zhì)等反應(yīng),為臨床安全用藥提供依據(jù)。 

穩(wěn)定性試驗的分析方法與要求

適用于藥物穩(wěn)定性試驗樣品質(zhì)量檢測的分析方法稱為穩(wěn)定性指示分析法。 穩(wěn)定性指示分析法應(yīng)該能夠準(zhǔn)確檢測出藥物原料和制劑的質(zhì)量隨著穩(wěn)定性試驗考察因素的作用和時間的延長而可能出現(xiàn)的變化。

即，穩(wěn)定性指示分析法應(yīng)能夠不受降解產(chǎn)物、工藝雜質(zhì)、賦形劑或其他潛在雜質(zhì)的影響,而準(zhǔn)確測定藥物中的活性成分,并能夠定性和(或)定量地監(jiān)測藥物中的雜質(zhì)(包括降解產(chǎn)物)。

穩(wěn)定性試驗中所用的含量測定方法應(yīng)當(dāng)具備穩(wěn)定性指示能力。如果所用含量測定方法的專屬性不能滿足穩(wěn)定性試驗的要求,則必須增加能夠進行雜質(zhì)(包括降解產(chǎn)物)定性和定量監(jiān)測的分析方法對其進行補充。 所以,常用的穩(wěn)定性指示分析法主要是色譜分析法,如HPLC,HPTLC等。

穩(wěn)定性指示分析法建立時,為了保障其適用性,通常均要求在試驗樣品的制備、分析條件的建立和試驗方法的驗證3個方面進行全面的試驗研究。

1、試驗樣品的制備 試驗樣品包括:起始原料、中間體,粗品原料、藥物成品,以及將藥物經(jīng)過破壞(苛性)處理使主成分含量下降約5%~20%而包含分降解產(chǎn)物的樣品.對于復(fù)方制劑,則需要對各藥效成分既分別又合并進行破壞處理。

常用的破壞處理方法是將藥物固體和(或)其適宜的溶液置于比加速和影響因素試驗更為劇烈的條件下進行破壞,生成分降解產(chǎn)物。 這樣既可以滿足考察穩(wěn)定性指示分析法適用性的需要,又可以建立藥物的分降解行為與途徑,鑒定可能的分降解產(chǎn)物,并獲得藥物的內(nèi)在穩(wěn)定性特征。

從而為預(yù)測藥物在貯藏過程中可能出現(xiàn)的分降解產(chǎn)物,并為藥物的生產(chǎn)制備工藝、制劑處方工藝、包裝與貯藏等條件的優(yōu)化與建立提供參考。

藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)不同,理化性質(zhì)有差異,其分降解行為也常常不同。水解、氧化、異構(gòu)化或聚合等,是藥物分降解的主要途徑,并有可能出現(xiàn)多途徑降解。所以,常用的破壞處理方法包括水解、氧化、高溫和光照等,如下表。

當(dāng)藥物在通常的溶劑條件下的溶解度不合適時.,還可以添加適宜的有機溶劑助溶,以便有效地產(chǎn)生分降解反應(yīng)。

破壞處理時,需同時制備:空白溶劑或輔料、平行破壞處理的空白溶劑或輔料、未經(jīng)破壞處理的樣品、平行破壞處理的單組分樣品,以便識別和鑒定分降解產(chǎn)物及其來源。 并可適當(dāng)增減調(diào)整破壞處理的程度,以便獲得破壞程度適宜的降解樣品。

對于具有手性、多晶型或順反異構(gòu)的藥物,還須特 別考察破壞處理過程中的手性、晶型或異構(gòu)的轉(zhuǎn)化。

2、分析條件的建立 常用的穩(wěn)定性指示分析法均為具有良好分離能力和專屬性的色譜方法。 為了檢驗穩(wěn)定性指示分析法的專屬性和適用性,應(yīng)采用起始原料、中間體、粗品原料及藥物經(jīng)過破壞處理生成分降解產(chǎn)物的樣品,進行分離效能的考察,確保所使用的方法滿足藥物中活性成分的專屬與準(zhǔn)確測定要求,滿足有關(guān)物質(zhì)的定性和(或)定量檢査的要求。

所以，在穩(wěn)定性指示色譜測定條件的建立過程中,必須對主成分峰以及需要逐一進行定量測定的所有特定雜質(zhì)峰,分別采用適宜的手段進行專屬性的確證。專屬性確證常用的方法包括：色譜峰純度PDA或MS鑒定的直接檢查法；改變色謂條件或色譜系統(tǒng),考察和比較色譜峰分離的間接檢查法;以及添加雜質(zhì)對照的驗證檢查法。

由于分降解產(chǎn)物與藥物活性成分常常具有明顯的理化和色譜行為差異,所以,在藥物雜質(zhì)檢查和穩(wěn)定性指示分析測定中,梯度HPLC 的使用巳變得越來越廣泛。 例如,ChP中阿司匹林的有關(guān)物質(zhì)檢查,自ChP2010即采用了梯度HPLC,而在ChP2005相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)中,除游離水楊酸外,沒有進行有關(guān)物質(zhì)的檢查。

當(dāng)然,穩(wěn)定性指示分析法并不一定要使破壞產(chǎn)生的所有分降解產(chǎn)物均能夠獲得專屬的分離。 尤其是那些已經(jīng)證明在加速和長期穩(wěn)定性試驗中不可能產(chǎn)生的雜質(zhì),在穩(wěn)定性指示分析法建立事，可以不予考慮。

3、試驗方法的驗證 根據(jù)穩(wěn)定性指示分析法的類型不同,應(yīng)分別對方法的專屬性、線性和范圍、精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度和耐用性等進行必要的驗證,結(jié)果應(yīng)與選用方法的類型相適宜。